附件3
硫酸-变色酸分光光度比色法定量测定食品等样品中毒鼠强
1 适用范围
本方法适用于食品、毒饵、水、呕吐物等样品中毒鼠强浓度的定量分析。环境样本以及生物样本中毒鼠强的测定可作为初步判断事件性质的重要参考。重大突发事件性质的判定，建议采用其他分析方法加以确证。
2 原理
毒鼠强在强酸条件下加热可分解，其分解产物中的甲醛在酸性条件下与变色酸发生变色反应，比色定量。
3 方法重要参数
3.1 线性范围：（0.5～10）μg/5.0ml。
3.2 精确度（RSD）：≤10%。
3.3 准确度（回收率）：90%～105%。
3.4 检出限：0.5μg/5.0ml。
3.5 干扰：醛类等对其可造成假阳性干扰，酚类可降低其灵敏度。
3.6 全程测定时间：30min。
4 试剂和仪器
4.1.仪器：酒精灯1个（电热杯或控温电炉）、分光光度计、试管若干、500ml烧杯1个、100ml烧杯2个、漏斗或滴管1个、玻璃棒1个、滤纸若干。
4.2 试剂：乙酸乙酯、60%浓硫酸，变色酸显色剂。
毒鼠强标准品从公安部门获得。
5 操作步骤
5.1 样品前处理
由于现场所采集的样品成分复杂，除少数样品，例如市售鼠药或工业原粉，可直接用本方法检测外，其他样品均需进行样品前处理以去除杂质干扰，提高灵敏度和降低假阳性率。
5.1.1鼠药和工业原粉
直接取少量0.1g～0.5g进行检测。
5.1.2固体样品（毒饵、米、面、茶叶、盐、呕吐物等）
取固体样品（颗粒大的固体需先研磨碎）1g～3g放入烧杯中，向烧杯中加入乙酸乙酯（苯或丙酮亦可）5ml，玻璃棒充分搅匀，静置5min，将上清液用滤纸过滤，重复上述过程一次，合并上清液至一大试管内，将试管置于沸水浴中，使提取液完全挥发。
注意：不要将已经挥发干的试管长时间置于沸水浴中，否则会影响回收率，出现假阴性。
5.1.3液体样品（水、酒、饮料、酱油、醋等）
取液体样品1ml～3ml放入大试管中，加入乙酸乙酯5ml，充分振荡混匀，静置5min，用分液漏斗或滴管分离上清液，重复过程一次，合并上清液至大试管内，将试管置于沸水浴中，使提取液完全挥发。酱油、醋、有颜色的饮料等液体样品在乙酸乙酯萃取后使用少量活性炭（聚酰胺粉或硅藻土亦可）进行脱色处理，以防止颜色干扰。
5.2 定量分析
5.2.1绘制标准曲线
吸取相当于0μg、0.1μg、0.2μg、0.3μg、0.4μg、0.5μg的标准物加入2%变色酸0.2ml，加60%硫酸5.0ml，放置100℃水浴10min后以1cm比色皿在573nm波长处比色。
5.2.2. 样品分析
用测定标准系列的操作条件测定样品溶液和空白对照溶液。样品吸光度减去空白对照吸光度后，由标准曲线得出毒鼠强含量。
5.2.3计算
根据取样量M(g)及样品中毒鼠强含量C(μg)按下式计算样品含量。
样品含量(μg/kg)=[C/M]×1000
6 质量控制
检测时，应同时加做阴性样品。
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