附件5
异羟肟酸铁反应法定性测定食品等样品中氟乙酰胺
1 适用范围
本方法适用于食品、毒饵、水、呕吐物样品，可作为初步判断事件性质的重要参考，不能作为确定事件性质的依据。氟乙酰胺的检测目前无国家标准分析方法，重大突发事件性质的判定，建议采用其他分析方法加以确证。
2 原理
氟乙酰胺与羟胺在碱性条件下，生成异羟肟酸，与三价铁离子作用发生变色反应，通过颜色变化对氟乙酰胺进行定性。
3 方法重要参数
3.1 检出限：50μg/ml。
3.2 干扰：碱度过高对其可造成假阳性干扰，酸度过高可造成假阴性干扰。
3.3 全程测定时间：15min。
4 试剂和仪器
4.1 仪器：酒精灯1个（或电热杯1个）、试管若干、500ml烧杯1个、100ml烧杯2个、漏斗或滴管1个、玻璃棒1个、滤纸若干，PH试纸。
4.2 试剂：活性炭或中性氧化铝、氢氧化钠溶液，盐酸羟胺溶液、盐酸溶液、三氯化铁。
4.3 氟乙酰胺标准品从公安部门获得。
5 样品前处理
由于现场所采集的样品成分复杂，除少数样品，例如市售鼠药或工业原粉，可直接用本方法检测外，其他样品均需进行样品前处理来以去除杂质干扰，提高灵敏度和降低假阳性率。
5.1 鼠药和工业原粉
直接取少量0.1g～0.5g进行检测。
5.2 固体样品（毒饵、米、面、茶叶、盐、呕吐物等）
取固体样品（颗粒大的固体需先研磨碎）2g～5g放入10ml比色管中，加入三倍于样品重的蒸馏水或纯净水，振摇后过滤，将上清液用滤纸过滤，重复上述过程一次，合并上清液至一大试管内，将比色管置于沸水浴中，使滤液煮沸浓缩至1ml左右。注意：不要将已经挥发干的试管长时间置于沸水浴中，否则会影响回收率，出现假阴性。
5.3 液体样品（水、酒、饮料、酱油、醋等）
取液体样品5ml放入大试管中，加入等量于样品重的蒸馏水或纯净水，充分振荡混匀，静置5min，用分液漏斗或滴管分离上清液，重复过程一次，合并上清液至大试管内，将试管置于沸水浴中，使滤液煮沸浓缩至1ml左右。酱油、醋、有颜色的饮料等液体样品使用少量活性炭或中性氧化铝进行脱色处理，以防止颜色干扰。
6 样品测定
取待检液1ml左右于试管中，加氢氧化钠溶液10滴，加盐酸羟胺溶液5滴，置沸水中水浴5min（使其充分水解成氟乙酸钠释放出氨）。取出放冷，加盐酸溶液9～10滴（调pH值至3～5）后，加三氯化铁溶液3～10滴（使其与氟乙酸反应），取出观察颜色变化。同时取一干净的空试管进行同样操作作为对照。
7 结果判定
阳性：粉红或紫红色，尤其在滴加后的液面上更为明显。
阴性：浅黄或黄色。
8 说明
8.1 加盐酸溶液9滴后要用pH试纸测试溶液pH值，若pH值太高(碱度过高)，加入三氯化铁溶液时可产生红棕色沉淀，影响结果判定，造成假阳性结果；若pH值太低(酸度过高)，加入三氯化铁溶液后氟乙酰胺显色不敏锐或不显色，易造成假阴性结果。pH值可用氢氧化钠溶液和盐酸溶液反向调整。
8.2 空白对照试验，取与样品相同（不含氟乙酰胺）的物质与样品同时操作，以便于观察对比。对于呕吐物、胃内容物等样品，应加阳性对照试验。
8.3 测定时做空白对照试验，阴性结果为浅黄或黄色，有些空白对照为黄棕色絮状沉淀，静置后上层液变成无色或仅呈浅黄色。
8.4 本方法不适于血液和组织器官样品的测定。
8.5 三氯化铁溶液放置时间长时会有少量沉淀产生，须摇匀后使用。组合试剂的有效期为1年，阳性对照试验无反应时不可再用。
9 质量控制
检测时，应同时做阴性样品及氟乙酰胺标准品。
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