附件6
液液萃取/气相色谱氮磷检测器法定量测定血浆中毒鼠强
1 适用范围
用于定量测定血浆样品中毒鼠强。
2 原理
使用液液萃取对样品前进行前处理，然后将处理后样品定容，并经过毛细管柱分离，使用氮磷检测器对其中组分毒鼠强进行测定，通过毒鼠强标准品的保留时间以及标准曲线来进行定性和定量检测。
3 方法重要参数
3.1 线性范围：可对血浆中毒鼠强含量在10ng/ml～500ng/ml的样品进行毒鼠强定量测定。
3.2 精密度：批内、批间RSD≤10%。
3.3 准确度（回收率）：90%～110%。
3.4 检出限：最低定量浓度为10ng/ml。
3.5 全程测定时间：120min。
4 器材与试剂
气相色谱仪（配置氮磷检测器）；非极性毛细管气相色谱柱（HP-1）；振荡仪；离心机；微量加样器；吹氮仪
毒鼠强标准；乙酸乙酯
5 操作步骤
5.1 色谱条件
a) 色谱柱：HP-1交联石英毛细管柱30m×0.32mm i.d.×0.25µm。
b) 温度：进样口250℃，检测器250℃。程序升温：初始温度150℃，保持1min，以7℃/min的速率升温至250℃，保持1min。
c) 载气：高纯氮气，柱头压力35kPa，不分流进样，分流时间0.75min，隔垫清扫：3.6ml/min。尾吹流量：30ml/min。氢气流量：3.3ml/min。空气流量：86ml/min。
5.2 标准曲线的配制
称取100mg毒鼠强标准，用乙酸乙酯在100ml容量瓶中定容，配制成1mg/ml的毒鼠强储备液。用储备液稀释出5µg/ml、2µg/ml、1µg/ml、0.5µg/ml、0.2µg/ml和0.1µg/ml的标准溶液，利用此系列标准溶液绘制标准曲线，相关系数为0.999。
5.3 样品前处理
取出1ml血浆样品放入试管中，加入2ml乙酸乙酯，石蜡膜封口，振荡混匀4min（如果乳化现象比较严重，可以加入0.5ml的异丙醇），3000rpm离心4min，将上清液取出，重复上述萃取过程一次，将两次上清液合并。合并的上清液在40℃水浴下吹氮至近干，加入0.1ml乙酸乙酯定容，振荡混匀1min。
5.4 进样检测
取定容后的溶液1μl进样检测，保留时间定性，峰面积定量。
6 质量控制
6.1 空白对照样色谱图上没有保留时间与毒鼠强相同的峰。
6.2 进待测样品前必须进空白样或乙酸乙酯溶剂，以确认进样针和色谱仪器系统未受污染。
6.3 质控样测得值应在质控样品浓度的90%～110%之间。
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